अल्ट्रा हाईफिडेलिटी पीसीआर किट

उच्च निष्ठा, उच्च विशिष्टता और उच्च दक्षता हॉट-स्टार्ट पीसीआर प्रीमिक्स।

अल्ट्रा हाईफिडेलिटी पीसीआर किट पीसीआर से संबंधित क्लोनिंग और डिटेक्शन के लिए उपयुक्त एक नया हाई-फिडेलिटी पीसीआर एम्प्लीफिकेशन प्रीमिक्स है। किट में निहित अल्ट्रा हाईफाई डीएनए पोलीमरेज़ निर्देशित आणविक विकास प्रौद्योगिकी द्वारा विकसित एक नया तेज़ और उच्च-निष्ठा डीएनए पोलीमरेज़ है। यह टेम्प्लेट के लिए डीएनए पोलीमरेज़ की आत्मीयता को बढ़ाता है, एंजाइम की प्रवर्धन गति और विस्तार क्षमता में सुधार करता है, और पीसीआर और उत्पाद की उपज की सफलता दर को बढ़ाता है।

बिल्ली। नहीं पैकिंग आकार
4992970 1 मिली
4992971 5*1मिली
4992978 5*5*1मिली

 

 


वास्तु की बारीकी

प्रायोगिक उदाहरण

सामान्य प्रश्न

उत्पाद टैग

विशेषताएं

संचालित करने में आसान: यह किट 2 × प्रीमिक्स के रूप में आपूर्ति की जाती है, और पीसीआर को केवल टेम्प्लेट और प्राइमर जोड़कर किया जा सकता है।
उच्च निष्ठा: ताक पोलीमरेज़ की निष्ठा 50 गुना है।
■ उच्च विशिष्टता: उत्पाद विशिष्टता सुनिश्चित करने के लिए उत्कृष्ट हॉट-स्टार्ट प्रदर्शन ..
तीव्र प्रवर्धन: विस्तार की गति 10-15 सेकंड/केबी तक पहुंच सकती है।
मजबूत एक्स्टेंसिबिलिटी: 20 kb तक डीएनए अंशों को बढ़ाया जा सकता है।
■ व्यापक प्रयोज्यता: किट में पीसीआर एन्हांसर शामिल है और यह उच्च जीसी और जटिल टेम्पलेट्स के प्रवर्धन के लिए उपयुक्त है।

विनिर्देश

प्रकार: उच्च निष्ठा डीएनए पोलीमरेज़
प्रवर्धन गति: 10-15 सेकंड/kb
टुकड़ा आकार: <20kb
अनुप्रयोग: उच्च निष्ठा पीसीआर प्रवर्धन, जीन क्लोनिंग, उच्च जीसी टेम्पलेट प्रवर्धन, जटिल जीनोम की जीन क्लोनिंग, सीडीएनए उच्च निष्ठा प्रवर्धन, एसएनपी का पता लगाना, साइट-विशिष्ट उत्परिवर्तन, आदि।
विभिन्न पौधों के ऊतकों से डीएनए निष्कर्षण उपज:
नोट: डीएनए उपज नमूना प्रकार पर निर्भर करता है। उपरोक्त सभी सामग्रियां कोमल पत्तियों से हैं।

सभी उत्पादों को ODM/OEM के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। ब्योरा हेतु,कृपया क्लिक करें अनुकूलित सेवा (ODM/OEM)


  • पहले का:
  • अगला:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example उत्पाद विशिष्टता सुनिश्चित करने के लिए हॉट-स्टार्ट
    चित्रा 1. अल्ट्रा हाईफाई में प्रवर्धन उत्पादों की विशिष्टता सुनिश्चित करने के लिए उत्कृष्ट हॉट-स्टार्ट फ़ंक्शन है। आणविक बीकन विधि लागू की गई थी (मा एट अल।, गुदा बायोकेम, 2006)।
    Experimental Example उत्कृष्ट उच्च निष्ठा, ताक पोलीमरेज़ से 50 गुना अधिक
    चित्र 2. Ultra HiFi की विश्वसनीयता सामान्य Taq पोलीमरेज़ की तुलना में 50 गुना अधिक है। Taq पोलीमरेज़ (सुधारात्मक गतिविधि के बिना) की पोलीमराइज़ेशन निष्ठा को संदर्भ के रूप में उपयोग किया जाता है।
    Experimental Example तेजी से प्रवर्धन और लंबे टुकड़ों को तेजी से बढ़ाया जा सकता है
    अंजीर। 3. Ultra HiFi 4 kb से छोटे टुकड़ों के लिए 5 सेकंड/kb तक बढ़ा सकता है। लंबे टुकड़ों के लिए, प्रवर्धन समय को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है। 15 kb से अधिक के टुकड़े के लिए, सीमा गति 30 सेकंड/kb तक हो सकती है। एम: टियांजेन डी 15000 मार्कर
    Experimental Example Experimental Example Experimental Example मजबूत सार्वभौमिकता और उच्च विशिष्टता, उच्च जीसी पढ़ने में आसान और विभिन्न स्रोतों से लंबे अंश
    चित्रा 4. अल्ट्रा हाईफाई में विभिन्न प्रकार के टेम्पलेट्स के लिए प्रवर्धन सफलता दर और उत्पाद मात्रा सुनिश्चित करने के लिए उच्च विशिष्टता है।
    A. अल्ट्रा HiFi प्रवर्धन परिणाम
    B. आपूर्तिकर्ता K . के हाई-फाई एंजाइम प्रवर्धन परिणाम
    C. आपूर्तिकर्ता N . के हाई-फाई एंजाइम प्रवर्धन परिणाम
    एम: टियांजेन डी 15000 मार्कर
    लेन 1-5। विभिन्न लंबाई के साथ टेम्पलेट्स के प्रवर्धन परिणाम: 1. ७५० बीपी; 2. 1 केबी; 3.
    2 केबी; 4. 4 केबी; 5. 6 केबी
    लेन 6. उच्च जीसी टेम्पलेट का प्रवर्धन परिणाम: १९१५ बीपी (जीसी%: ७०%);
    लेन 7-11। विभिन्न जीनोम से 2 kb टेम्प्लेट का प्रवर्धन परिणाम: 7. चूहा; 8.
    चावल; 9. गेहूं; 10. मकई; 11. बैक्टीरिया;
    लेन 12-14। 8 केबी लंबा टुकड़ा प्रवर्धन परिणाम: 12. चावल; 13. मकई;
    प्रश्न: कोई प्रवर्धन बैंड नहीं

    ए-1 टेम्पलेट

    टेम्पलेट में प्रोटीन अशुद्धियाँ या Taq अवरोधक, आदि शामिल हैं ——डीएनए टेम्पलेट को शुद्ध करें, प्रोटीन अशुद्धियों को दूर करें या शुद्धिकरण किट के साथ टेम्पलेट डीएनए निकालें।

    टेम्पलेट का विकृतीकरण पूर्ण नहीं है ——विकृतीकरण तापमान को उचित रूप से बढ़ाएं और विकृतीकरण समय को लंबा करें।

    टेम्प्लेट डिग्रेडेशन ——टेम्पलेट को फिर से तैयार करें।

    ए-2 प्राइमर

    ■ प्राइमरों की खराब गुणवत्ता ——प्राइमर को फिर से संश्लेषित करें।

    प्राइमर डिग्रेडेशन ——उच्च सांद्रता वाले प्राइमरों को परिरक्षण के लिए छोटी मात्रा में विभाज्य करें। एकाधिक ठंड और विगलन या लंबे समय तक 4 डिग्री सेल्सियस क्रायोप्रेज़र्व्ड से बचें।

    प्राइमरों का अनुचित डिज़ाइन (उदाहरण के लिए प्राइमर की लंबाई पर्याप्त नहीं है, प्राइमरों के बीच डिमर का गठन, आदि) -रीडिज़ाइन प्राइमर (प्राइमर डिमर और सेकेंडरी स्ट्रक्चर के गठन से बचें)

    ए-3 मिलीग्राम2+एकाग्रता

    एमजी2+ एकाग्रता बहुत कम है —— उचित रूप से Mg . बढ़ाएँ2+ एकाग्रता: Mg . का अनुकूलन करें2+ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता2+ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

    ए -4 एनीलिंग तापमान

    उच्च एनीलिंग तापमान प्राइमर और टेम्पलेट के बंधन को प्रभावित करता है। ——एनीलिंग तापमान को कम करें और 2 डिग्री सेल्सियस की ढाल के साथ स्थिति को अनुकूलित करें।

    ए-5 विस्तार समय

    ■ लघु विस्तार समय——विस्तार समय बढ़ाएँ।

    प्रश्न: झूठी सकारात्मक

    घटना: नकारात्मक नमूने लक्ष्य अनुक्रम बैंड भी दिखाते हैं।

    ए-1 पीसीआर का संदूषण

    लक्ष्य अनुक्रम या प्रवर्धन उत्पादों का क्रॉस संदूषण ——ध्यान से नकारात्मक नमूने में लक्ष्य अनुक्रम वाले नमूने को पिपेट न करें या उन्हें अपकेंद्रित्र ट्यूब से बाहर न फैलाएं। मौजूदा न्यूक्लिक एसिड को खत्म करने के लिए अभिकर्मकों या उपकरणों को ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए, और संदूषण के अस्तित्व को नकारात्मक नियंत्रण प्रयोगों के माध्यम से निर्धारित किया जाना चाहिए।

    अभिकर्मक संदूषण ——अभिकर्मकों को विभाज्य करें और कम तापमान पर स्टोर करें।

    ए-2 प्राइमr

    एमजी2+ एकाग्रता बहुत कम है —— उचित रूप से Mg . बढ़ाएँ2+ एकाग्रता: Mg . का अनुकूलन करें2+ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता2+ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

    अनुचित प्राइमर डिज़ाइन, और लक्ष्य अनुक्रम में गैर-लक्षित अनुक्रम के साथ समरूपता है। —— प्राइमरों को फिर से डिजाइन करें।

    प्रश्न: गैर-विशिष्ट प्रवर्धन

    घटना: पीसीआर प्रवर्धन बैंड अपेक्षित आकार के साथ असंगत होते हैं, या तो बड़े या छोटे, या कभी-कभी दोनों विशिष्ट प्रवर्धन बैंड और गैर-विशिष्ट प्रवर्धन बैंड होते हैं।

    ए-1 प्राइमर

    ■ खराब प्राइमर विशिष्टता

    —— प्राइमर को फिर से डिजाइन करें।

    प्राइमर की सघनता बहुत अधिक है ——विकृतीकरण तापमान को ठीक से बढ़ाएँ और विकृतीकरण समय को लम्बा करें।

    ए-2 मिलीग्राम2+ एकाग्रता

    एमजी2+ एकाग्रता बहुत अधिक है ——Mg2+ सांद्रता को ठीक से कम करें: Mg . को ऑप्टिमाइज़ करें2+ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता2+ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

    ए-3 थर्मोस्टेबल पोलीमरेज़

    अत्यधिक एंजाइम मात्रा - 0.5 यू के अंतराल पर एंजाइम की मात्रा को उचित रूप से कम करें।

    ए -4 एनीलिंग तापमान

    एनीलिंग तापमान बहुत कम है - एनीलिंग तापमान को उचित रूप से बढ़ाएं या दो-चरण एनीलिंग विधि अपनाएं

    ए-5 पीसीआर चक्र

    बहुत अधिक पीसीआर चक्र ——पीसीआर चक्रों की संख्या कम करें।

    प्रश्न: पैची या स्मीयर बैंड

    ए-1 प्राइमर——खराब विशिष्टता ——प्राइमर को फिर से डिज़ाइन करें, इसकी विशिष्टता बढ़ाने के लिए प्राइमर की स्थिति और लंबाई बदलें; या नेस्टेड पीसीआर करें।

    A-2 टेम्प्लेट डीएनए

    ——टेम्पलेट शुद्ध नहीं है ——टेम्पलेट को शुद्ध करें या शुद्धिकरण किट से डीएनए निकालें।

    ए-3 मिलीग्राम2+ एकाग्रता

    ——एमजी2+ एकाग्रता बहुत अधिक है ——Mg . को ठीक से कम करें2+ एकाग्रता: Mg . का अनुकूलन करें2+ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता2+ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

    ए-4 डीएनटीपी

    ——dNTPs की सांद्रता बहुत अधिक है ——dNTP की सांद्रता को उचित रूप से कम करें

    ए -5 एनीलिंग तापमान

    ——बहुत कम एनीलिंग तापमान ——एनीलिंग तापमान को उचित रूप से बढ़ाएं

    ए-6 चक्र

    ——बहुत सारे चक्र ——चक्र संख्या को अनुकूलित करें

    प्रश्न: ५० μl पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली में कितना टेम्पलेट डीएनए जोड़ा जाना चाहिए?
    ytry
    प्रश्न: लंबे टुकड़ों को कैसे बढ़ाया जाए?

    पहला कदम उपयुक्त पोलीमरेज़ चुनना है। नियमित टाक पोलीमरेज़ 3'-5' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि की कमी के कारण प्रूफरीड नहीं कर सकता है, और बेमेल टुकड़ों की विस्तार दक्षता को बहुत कम कर देगा। इसलिए, नियमित टाक पोलीमरेज़ 5 केबी से बड़े लक्ष्य अंशों को प्रभावी ढंग से नहीं बढ़ा सकता है। विस्तार दक्षता में सुधार और लंबे टुकड़े के प्रवर्धन की जरूरतों को पूरा करने के लिए विशेष संशोधन या अन्य उच्च निष्ठा पोलीमरेज़ के साथ टाक पोलीमरेज़ का चयन किया जाना चाहिए। इसके अलावा, लंबे टुकड़ों के प्रवर्धन के लिए भी प्राइमर डिजाइन, विकृतीकरण समय, विस्तार समय, बफर पीएच, आदि के अनुरूप समायोजन की आवश्यकता होती है। आमतौर पर, 18-24 बीपी वाले प्राइमर बेहतर उपज दे सकते हैं। टेम्पलेट क्षति को रोकने के लिए, ९४ डिग्री सेल्सियस पर विकृतीकरण का समय प्रति चक्र ३० सेकंड या उससे कम होना चाहिए, और प्रवर्धन से पहले तापमान को ९४ डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाने का समय १ मिनट से कम होना चाहिए। इसके अलावा, विस्तार तापमान को लगभग 68 डिग्री सेल्सियस पर सेट करना और 1 केबी/मिनट की दर के अनुसार विस्तार समय को डिजाइन करना लंबे टुकड़ों के प्रभावी प्रवर्धन को सुनिश्चित कर सकता है।

    प्रश्न: पीसीआर की प्रवर्धन निष्ठा में सुधार कैसे करें?

    उच्च निष्ठा के साथ विभिन्न डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग करके पीसीआर प्रवर्धन की त्रुटि दर को कम किया जा सकता है। अब तक पाए गए सभी टाक डीएनए पोलीमरेज़ में, पीएफयू एंजाइम की त्रुटि दर सबसे कम और उच्चतम निष्ठा है (संलग्न तालिका देखें)। एंजाइम चयन के अलावा, शोधकर्ता प्रतिक्रिया की स्थिति को अनुकूलित करके पीसीआर उत्परिवर्तन दर को और कम कर सकते हैं, जिसमें बफर संरचना का अनुकूलन, थर्मोस्टेबल पोलीमरेज़ की एकाग्रता और पीसीआर चक्र संख्या का अनुकूलन शामिल है।

    अपना संदेश यहाँ लिखें और हमें भेजें