जीएमओ फसल निष्कर्षण और प्रवर्धन किट

जीएमओ फसल निष्कर्षण और ट्रांसजेनिक पीसीआर का पता लगाने के लिए विशेष रूप से उपयुक्त।

जीएमओ फसल निष्कर्षण और प्रवर्धन किट विशेष रूप से जीएमओ फसलों की पीसीआर पहचान के लिए विकसित की गई है। किट के भाग ए में निहित अद्वितीय लिसीज़ बफर विशेष रूप से मुख्य फसलों--गेहूं, मक्का, चावल, कपास और सोयाबीन के ऊतकों को न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन जैसे संबंधित घटकों को मुक्त करने के लिए लाइस कर सकता है। विशिष्ट RNase के साथ संयुक्त फिनोल / क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण उच्च शुद्धता जीनोमिक डीएनए को शुद्ध कर सकता है जिसमें आरएनए, प्रोटीन और धातु आयन जैसी कोई अशुद्धता नहीं होती है। शुद्ध डीएनए को बाद में पीसीआर डिटेक्शन में लागू किया जा सकता है। किट का भाग बी एक दो-घटक सरल पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली है जिसमें 2 × जीएमओ पीसीआर बफर और जीएमओ डीएनए पोलीमरेज़ शामिल हैं। जीएमओ डीएनए पोलीमरेज़ एक थर्मोस्टेबल पोलीमरेज़ है जिसे एंटीबॉडी के साथ संशोधित किया गया है। 2×GMO PCR बफर में विभिन्न घटक होते हैं जैसे MgCl₂, dNTPs, PCR रिएक्शन स्टेबलाइजर, ऑप्टिमाइज़र और एन्हांसर 2 × GMO की सांद्रता पर। इसमें तेज और सरल ऑपरेशन, उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता, अच्छी स्थिरता आदि के फायदे हैं। इसका उपयोग जीएमओ फसल ट्रांसजेनिक पीसीआर पहचान के लिए भाग ए के संयोजन में किया जा सकता है।

बिल्ली। नहीं	पैकिंग आकार
4992905	200 आरएक्सएन

हमें ईमेल भेजें

वास्तु की बारीकी

प्रायोगिक उदाहरण

सामान्य प्रश्न

उत्पाद टैग

विशेषताएं

व्यापक प्रयोज्यता: यह किट पांच प्रमुख जीएमओ फसलों से उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए निकाल सकती है।
■ सरल और तेज: जीएमओ फसल जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण 2 घंटे के भीतर पूरा किया जा सकता है। बड़े रेफ्रिजेरेटेड सेंट्रीफ्यूज, उपकरणों और उपकरणों के लिए कम आवश्यकताओं की कोई आवश्यकता नहीं है। अनुसंधान संस्थानों के सभी स्तरों पर जीएमओ फसलों के तेजी से जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए उपयुक्त।
■ उच्च दक्षता और विशिष्टता: एंटीबॉडी-संशोधित टैक पोलीमरेज़ का अद्वितीय बफर कुशल पोलीमरेज़ एम्पलीफिकेशन सुनिश्चित करता है, जो सामान्य टाक पोलीमरेज़ की तुलना में अधिक विशिष्ट है।

अनुप्रयोग

किट गेहूं, मक्का, चावल, कपास और सोयाबीन जैसी प्रमुख जीएमओ फसलों से उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए निकाल सकती है और जीएमओ फसलों पर ट्रांसजेनिक पीसीआर का पता लगा सकती है।

सभी उत्पादों को ODM/OEM के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। ब्योरा हेतु,कृपया क्लिक करें अनुकूलित सेवा (ODM/OEM)

पहले का: फास्टकिंग वन स्टेप आरटी-क्यूपीसीआर किट (जांच)

अगला: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण
जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण क्रमशः चावल, मक्का, सोयाबीन, कपास और गेहूं की 100 मिलीग्राम पत्तियों पर किया गया था। प्रयोग दो बार दोहराया गया था। कुल 100 μl eluents में से 3 μl डीएनए प्रति लेन लोड किया गया था।
agarose gel की सांद्रता 2% थी। वैद्युतकणसंचलन 20 मिनट के लिए 6 वी / सेमी के तहत किया गया था।
D15000: TIANGEN D15000 डीएनए मार्कर।

पीसीआर डिटेक्शन
चावल, मक्का, सोयाबीन, कपास और गेहूं के जीनोमिक डीएनए को क्रमशः प्रवर्धित किया गया। प्रयोग दो बार दोहराया गया था। कुल 20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली से 6 μl प्रति लेन लोड किया गया था।
agarose gel की सांद्रता 2% थी। वैद्युतकणसंचलन 20 मिनट के लिए 6 वी / सेमी के तहत किया गया था।
D15000: TIANGEN D15000 डीएनए मार्कर।

प्रश्न: कोई प्रवर्धन बैंड नहीं

ए-1 टेम्पलेट

टेम्पलेट में प्रोटीन अशुद्धियाँ या Taq अवरोधक, आदि शामिल हैं ——डीएनए टेम्पलेट को शुद्ध करें, प्रोटीन अशुद्धियों को दूर करें या शुद्धिकरण किट के साथ टेम्पलेट डीएनए निकालें।

टेम्पलेट का विकृतीकरण पूर्ण नहीं है ——विकृतीकरण तापमान को उचित रूप से बढ़ाएं और विकृतीकरण समय को लंबा करें।

टेम्प्लेट डिग्रेडेशन ——टेम्पलेट को फिर से तैयार करें।

ए-2 प्राइमर

■ प्राइमरों की खराब गुणवत्ता ——प्राइमर को फिर से संश्लेषित करें।

प्राइमर डिग्रेडेशन ——उच्च सांद्रता वाले प्राइमरों को परिरक्षण के लिए छोटी मात्रा में विभाज्य करें। एकाधिक ठंड और विगलन या लंबे समय तक 4 डिग्री सेल्सियस क्रायोप्रेज़र्व्ड से बचें।

प्राइमरों का अनुचित डिज़ाइन (उदाहरण के लिए प्राइमर की लंबाई पर्याप्त नहीं है, प्राइमरों के बीच डिमर का गठन, आदि) -रीडिज़ाइन प्राइमर (प्राइमर डिमर और सेकेंडरी स्ट्रक्चर के गठन से बचें)

ए-3 मिलीग्राम²⁺एकाग्रता

एमजी²⁺ एकाग्रता बहुत कम है —— उचित रूप से Mg . बढ़ाएँ²⁺एकाग्रता: Mg . का अनुकूलन करें²⁺ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

ए -4 एनीलिंग तापमान

उच्च एनीलिंग तापमान प्राइमर और टेम्पलेट के बंधन को प्रभावित करता है। ——एनीलिंग तापमान को कम करें और 2 डिग्री सेल्सियस की ढाल के साथ स्थिति को अनुकूलित करें।

ए-5 विस्तार समय

■ लघु विस्तार समय——विस्तार समय बढ़ाएँ।

प्रश्न: झूठी सकारात्मक

घटना: नकारात्मक नमूने लक्ष्य अनुक्रम बैंड भी दिखाते हैं।

ए-1 पीसीआर का संदूषण

लक्ष्य अनुक्रम या प्रवर्धन उत्पादों का क्रॉस संदूषण ——ध्यान से नकारात्मक नमूने में लक्ष्य अनुक्रम वाले नमूने को पिपेट न करें या उन्हें अपकेंद्रित्र ट्यूब से बाहर न फैलाएं। मौजूदा न्यूक्लिक एसिड को खत्म करने के लिए अभिकर्मकों या उपकरणों को ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए, और संदूषण के अस्तित्व को नकारात्मक नियंत्रण प्रयोगों के माध्यम से निर्धारित किया जाना चाहिए।

अभिकर्मक संदूषण ——अभिकर्मकों को विभाज्य करें और कम तापमान पर स्टोर करें।

ए-2 प्राइमr

एमजी²⁺ एकाग्रता बहुत कम है —— उचित रूप से Mg . बढ़ाएँ²⁺ एकाग्रता: Mg . का अनुकूलन करें²⁺ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

अनुचित प्राइमर डिज़ाइन, और लक्ष्य अनुक्रम में गैर-लक्षित अनुक्रम के साथ समरूपता है। —— प्राइमरों को फिर से डिजाइन करें।

प्रश्न: गैर-विशिष्ट प्रवर्धन

घटना: पीसीआर प्रवर्धन बैंड अपेक्षित आकार के साथ असंगत होते हैं, या तो बड़े या छोटे, या कभी-कभी दोनों विशिष्ट प्रवर्धन बैंड और गैर-विशिष्ट प्रवर्धन बैंड होते हैं।

ए-1 प्राइमर

■ खराब प्राइमर विशिष्टता

—— प्राइमर को फिर से डिजाइन करें।

प्राइमर की सघनता बहुत अधिक है ——विकृतीकरण तापमान को ठीक से बढ़ाएँ और विकृतीकरण समय को लम्बा करें।

ए-2 मिलीग्राम²⁺ एकाग्रता

एमजी²⁺ एकाग्रता बहुत अधिक है ——Mg2+ सांद्रता को ठीक से कम करें: Mg . को ऑप्टिमाइज़ करें²⁺ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

ए-3 थर्मोस्टेबल पोलीमरेज़

अत्यधिक एंजाइम मात्रा - 0.5 यू के अंतराल पर एंजाइम की मात्रा को उचित रूप से कम करें।

ए -4 एनीलिंग तापमान

एनीलिंग तापमान बहुत कम है - एनीलिंग तापमान को उचित रूप से बढ़ाएं या दो-चरण एनीलिंग विधि अपनाएं

ए-5 पीसीआर चक्र

बहुत अधिक पीसीआर चक्र ——पीसीआर चक्रों की संख्या कम करें।

प्रश्न: पैची या स्मीयर बैंड

ए-1 प्राइमर——खराब विशिष्टता ——प्राइमर को फिर से डिज़ाइन करें, इसकी विशिष्टता बढ़ाने के लिए प्राइमर की स्थिति और लंबाई बदलें; या नेस्टेड पीसीआर करें।

A-2 टेम्प्लेट डीएनए

——टेम्पलेट शुद्ध नहीं है ——टेम्पलेट को शुद्ध करें या शुद्धिकरण किट से डीएनए निकालें।

ए-3 मिलीग्राम²⁺ एकाग्रता

——एमजी²⁺ एकाग्रता बहुत अधिक है ——Mg . को ठीक से कम करें²⁺ एकाग्रता: Mg . का अनुकूलन करें²⁺ इष्टतम Mg . निर्धारित करने के लिए 0.5 मिमी के अंतराल के साथ 1 मिमी से 3 मिमी तक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला द्वारा एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट और प्राइमर के लिए एकाग्रता।

ए-4 डीएनटीपी

——dNTPs की सांद्रता बहुत अधिक है ——dNTP की सांद्रता को उचित रूप से कम करें

ए -5 एनीलिंग तापमान

——बहुत कम एनीलिंग तापमान ——एनीलिंग तापमान को उचित रूप से बढ़ाएं

ए-6 चक्र

——बहुत सारे चक्र ——चक्र संख्या को अनुकूलित करें

प्रश्न: ५० μl पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली में कितना टेम्पलेट डीएनए जोड़ा जाना चाहिए?

प्रश्न: लंबे टुकड़ों को कैसे बढ़ाया जाए?

पहला कदम उपयुक्त पोलीमरेज़ चुनना है। नियमित टाक पोलीमरेज़ 3'-5' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि की कमी के कारण प्रूफरीड नहीं कर सकता है, और बेमेल टुकड़ों की विस्तार दक्षता को बहुत कम कर देगा। इसलिए, नियमित टाक पोलीमरेज़ 5 केबी से बड़े लक्ष्य अंशों को प्रभावी ढंग से नहीं बढ़ा सकता है। विस्तार दक्षता में सुधार और लंबे टुकड़े के प्रवर्धन की जरूरतों को पूरा करने के लिए विशेष संशोधन या अन्य उच्च निष्ठा पोलीमरेज़ के साथ टाक पोलीमरेज़ का चयन किया जाना चाहिए। इसके अलावा, लंबे टुकड़ों के प्रवर्धन के लिए भी प्राइमर डिजाइन, विकृतीकरण समय, विस्तार समय, बफर पीएच, आदि के अनुरूप समायोजन की आवश्यकता होती है। आमतौर पर, 18-24 बीपी वाले प्राइमर बेहतर उपज दे सकते हैं। टेम्पलेट क्षति को रोकने के लिए, ९४ डिग्री सेल्सियस पर विकृतीकरण का समय प्रति चक्र ३० सेकंड या उससे कम होना चाहिए, और प्रवर्धन से पहले तापमान को ९४ डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाने का समय १ मिनट से कम होना चाहिए। इसके अलावा, विस्तार तापमान को लगभग 68 डिग्री सेल्सियस पर सेट करना और 1 केबी/मिनट की दर के अनुसार विस्तार समय को डिजाइन करना लंबे टुकड़ों के प्रभावी प्रवर्धन को सुनिश्चित कर सकता है।

प्रश्न: पीसीआर की प्रवर्धन निष्ठा में सुधार कैसे करें?

उच्च निष्ठा के साथ विभिन्न डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग करके पीसीआर प्रवर्धन की त्रुटि दर को कम किया जा सकता है। अब तक पाए गए सभी टाक डीएनए पोलीमरेज़ में, पीएफयू एंजाइम की त्रुटि दर सबसे कम और उच्चतम निष्ठा है (संलग्न तालिका देखें)। एंजाइम चयन के अलावा, शोधकर्ता प्रतिक्रिया की स्थिति को अनुकूलित करके पीसीआर उत्परिवर्तन दर को और कम कर सकते हैं, जिसमें बफर संरचना का अनुकूलन, थर्मोस्टेबल पोलीमरेज़ की एकाग्रता और पीसीआर चक्र संख्या का अनुकूलन शामिल है।

अपना संदेश यहाँ लिखें और हमें भेजें

उत्पाद श्रेणियां

हमारा चयन क्यों

अपनी स्थापना के बाद से, हमारा कारखाना सिद्धांत का पालन करने के साथ प्रथम विश्व स्तरीय उत्पादों का विकास कर रहा है
पहले गुणवत्ता का। हमारे उत्पादों ने उद्योग में उत्कृष्ट प्रतिष्ठा प्राप्त की है और नए और पुराने ग्राहकों के बीच मूल्यवान विश्वास प्राप्त किया है।

जांच