RNAprep शुद्ध संयंत्र किट

A-1 कोशिका विश्लेषण या समरूपीकरण पर्याप्त नहीं है

---- नमूना उपयोग को कम करें, लसीका बफर की मात्रा बढ़ाएं, समरूपता और लसीका समय बढ़ाएं।

A-2 नमूना राशि बहुत बड़ी है

---- उपयोग किए गए नमूने की मात्रा कम करें या लिसिस बफर की मात्रा बढ़ाएं।

A-1 अपर्याप्त सेल लसीका या समरूपीकरण

---- नमूना उपयोग को कम करें, लसीका बफर की मात्रा बढ़ाएं, समरूपता और लसीका समय बढ़ाएं।

A-2 नमूना राशि बहुत बड़ी है

---- कृपया अधिकतम प्रसंस्करण क्षमता देखें।

ए -3 आरएनए कॉलम से पूरी तरह से अलग नहीं होता है

---- RNase-मुक्त पानी डालने के बाद, इसे सेंट्रीफ्यूज करने से पहले कुछ मिनट के लिए छोड़ दें।

ए -4 इथेनॉल एलुएंट . में

---- धोने के बाद, फिर से सेंट्रीफ्यूज करें और जितना हो सके वाशिंग बफर को हटा दें।

A-5 सेल कल्चर मीडियम पूरी तरह से हटाया नहीं गया है

---- कोशिकाओं को एकत्रित करते समय, कृपया जितना संभव हो सके संस्कृति माध्यम को हटाना सुनिश्चित करें।

A-6 RNA स्टोर में संग्रहित कोशिकाएं प्रभावी रूप से सेंट्रीफ्यूज नहीं होती हैं

---- आरएनएस्टोर घनत्व औसत सेल संस्कृति माध्यम से अधिक है; इसलिए केन्द्रापसारक बल बढ़ाया जाना चाहिए। 3000x ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करने का सुझाव दिया गया है।

ए -7 कम आरएनए सामग्री और नमूने में बहुतायत

---- यह निर्धारित करने के लिए एक सकारात्मक नमूने का उपयोग करें कि क्या कम उपज नमूना के कारण होती है।

ए-1 सामग्री ताजा नहीं है

---- ताजा ऊतकों को तुरंत तरल नाइट्रोजन में संग्रहित किया जाना चाहिए या निष्कर्षण प्रभाव सुनिश्चित करने के लिए तुरंत आरएनएस्टोर अभिकर्मक में डाल दिया जाना चाहिए।

A-2 नमूना राशि बहुत बड़ी है

---- नमूना राशि कम करें।

A-3 RNase संदूषकn

---- हालांकि किट में दिए गए बफर में RNase नहीं है, निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान RNase को दूषित करना आसान है और इसे सावधानी से संभाला जाना चाहिए।

A-4 वैद्युतकणसंचलन प्रदूषण

---- वैद्युतकणसंचलन बफर को बदलें और सुनिश्चित करें कि उपभोग्य और लोडिंग बफर RNase संदूषण से मुक्त हैं।

A-5 वैद्युतकणसंचलन के लिए बहुत अधिक लोड हो रहा है

---- नमूना लोडिंग की मात्रा कम करें, प्रत्येक कुएं की लोडिंग 2 μg से अधिक नहीं होनी चाहिए।

A-1 नमूना राशि बहुत बड़ी है

---- नमूना राशि कम करें।

A-2 कुछ नमूनों में उच्च डीएनए सामग्री होती है और इनका उपचार DNase से किया जा सकता है।

---- प्राप्त आरएनए समाधान के लिए RNase-मुक्त DNase उपचार करें, और उपचार के बाद आरएनए को सीधे बाद के प्रयोगों के लिए उपयोग किया जा सकता है, या आरएनए शुद्धि किट द्वारा आगे शुद्ध किया जा सकता है।

कांच के बने पदार्थ के लिए, १५० डिग्री सेल्सियस पर ४ घंटे के लिए बेक किया हुआ। प्लास्टिक के कंटेनरों के लिए, १० मिनट के लिए ०.५ एम NaOH में डूबे हुए, फिर RNase-मुक्त पानी से अच्छी तरह से कुल्ला और फिर RNase को पूरी तरह से हटाने के लिए स्टरलाइज़ करें। प्रयोग में प्रयुक्त अभिकर्मक या समाधान, विशेष रूप से पानी, RNase से मुक्त होना चाहिए। सभी अभिकर्मक तैयारियों के लिए RNase-मुक्त पानी का उपयोग करें (एक साफ कांच की बोतल में पानी डालें, DEPC को ०.१% (V/V) की अंतिम सांद्रता में जोड़ें, रात भर हिलाएं और आटोक्लेव करें)।